较之单细胞分离的步骤,克隆效率(克隆的生长)在细胞株开发工作流程中常常被忽略。实际上,单个细胞的活力复苏和成功生长是一个众所周知的挑战性问题。
在化学成分确定的无动物成分培养基中,细胞生长和增殖的能力容易受损,尤其是在受到压力时。SAL公司的‘Insti‘系列细胞培养基补充剂已被证明可以改善细胞生长,促进集落形成和提高克隆效率。这些补充剂适用于CHO和HEK细胞。
该补充剂已经在中国开放购买,从成本考虑,尤其适用于可以获得高单细胞铺板效率的VIPS客户。本文是国内某著名单抗生物科技公司实际使用时的实验报告。在本实验中,VIPS和InstiGRO CHO产品的组合显著且持续地增加了克隆生长的百分率,实测结果令人振奋。
往期介绍链接:
InstiGRO实测报告
一:实验情况介绍
1、测试地点
国内某著名单抗生物技术公司
2、选用细胞株
CHO–K1
3、细胞培养方式
选用CD CHO基础培养基,并采用MSX压力筛选方式进行细胞培养
4、细胞板选择
选用Corning Costa96孔板,且铺板时边缘一圈孔(36个孔)均舍弃不用
5、数据分析系统
借助Solentim CLD克隆追踪成像系统进行单克隆及克隆生长情况的确认
二:实验结果
1、实验一:基于手动有限稀释的方式进行铺板,选用0.5 cell/well 的浓度铺10块板,并进行编号,其中01到05号板在培养基中加入了InstiGRO添加剂,而06到10号板未加入该添加剂,且均在MSX压力筛选系统下进行细胞培养,培养7天后实验结果统计如下:
板子编号 | 单克隆孔存活数 | 多克隆孔存活数 | 总克隆孔存活数 |
CDCHO–SAL–01 | 9 | 5 | 14 |
CDCHO–SAL–02 | 7 | 2 | 9 |
CDCHO–SAL–03 | 6 | 3 | 9 |
CDCHO–SAL–04 | 7 | 2 | 9 |
CDCHO–SAL–05 | 6 | 6 | 12 |
CDCHO–06 | 0 | 0 | 0 |
CDCHO–07 | 0 | 0 | 0 |
CDCHO–08 | 0 | 0 | 0 |
CDCHO–09 | 0 | 0 | 0 |
CDCHO–10 | 0 | 0 | 0 |
从表中数据可以看到,未加入InstiGRO添加剂的5块板均没有细胞克隆长出来,而加了该添加剂的5块板均有差不多10个左右细胞克隆长出来,其中单克隆孔占70%左右,部分板子图像如下:
CDCHO–SAL–01号板子图像
CDCHO–06号板子图像
2、实验二:基于Solentim VIPs细胞铺板系统进行铺板,选用12000个/ml,12次模式铺4块板,并进行编号,其中01跟02号板子未加入添加剂,而03跟04号板子加入InstiGRO添加剂,且均在MSX压力筛选系统下进行细胞培养,培养7天后实验结果统计如下:
由表中数据可以看到,因为使用了
Solentim VIPs细胞铺板系统,所以能够达到80%的单克隆铺板效率,且未加入InstiGRO添加剂的2块板均没有细胞克隆长出来,而加了该添加剂的2块板均有差不多20个左右细胞克隆长出来,其中单克隆孔占70%左右,部分板子图像如下:
CDCHO–VIPs–02号板子图像
CDCHO–SAL–VIPs–03号板子图像
三、实验结论
根据实验一及实验二所得数据,进行归纳整理后,可得出以下结论:
1、InstiGRO培养基添加剂能够有效的大幅提高细胞存活率;
2、使用Solentim VIPs细胞铺板系统,能够达到80%左右的单细胞铺板率;
3、在加入了InstiGRO培养基添加剂的情况下,发现采用Solentim VIPs细胞铺板系统铺板最终的细胞存活数量是手动有限稀释铺板的2–3倍;
4、将实验一跟实验二数据进行整体比较,发现无论是手动有限稀释铺板还是Solentim VIPs铺板,未加添加剂的板子均没有细胞存活,而加了添加剂的板子中,单克隆的细胞存活数均占总体细胞存活数的70%,比例一致,说明Solentim VIPs铺板对细胞基本无损伤,即存活比率跟有限稀释铺板基本一致;